大鼠真皮毛乳頭細胞

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更新時間：2024-10-29

大鼠真皮毛乳頭細胞

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細胞簡介：

大鼠真皮毛乳頭分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較復雜的器官附件組織。毛囊實際上是由結締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來。真皮毛乳頭細胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細胞。在毛囊發育早期，真皮細胞向單層上皮細胞發出真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細胞向下方的真皮發出表皮信號，誘導其形成有成纖維細胞組成的凝集細胞團。在此過程中，毛母質細胞逐漸包裹凝集細胞團，形成成熟的真皮毛乳頭細胞。作為毛囊中的重要細胞群，真皮毛乳頭細胞的分子機制和臨床應用正在被逐漸認識和解析。

原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠真皮毛乳頭采用膠原酶-混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠真皮毛乳頭經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠真皮毛乳頭細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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